新闻中心

新闻  丨 2021.10.14

生物打印协议 CELLINK LAMININK

协议目标

该协议的目的是提供使用 INKREDIBLE 、INKREDIBLE+ 或 BIO X 的 CELLINK® LAMININK 系列进行生物打印的说明,并涵盖从预打印与细胞混合、3D 生物打印和离子交联的打印后过程的步骤。 CELLINK® LAMININK 系列包括 CELLINK® LAMININK111 、 CELLINK® LAMININK 121 、 CELLINK® LAMININK 411 、 CELLINK® LAMININK 521 和 CELLINK® LAMININK+。 该方案针对 CELLINK® LAMININK 进行了优化,未稀释以及使用 10+1 细胞悬液稀释。 更改协议中的参数可能会更改所需的交联时间。 该协议使用BIO X 的气动打印头进行了优化。1

所需材料

Cellink®层板*

清除墨盒,3cC*

无菌锥形生物打印喷嘴*

BioX*或InkRedible-系列*3D Bioprinter

孔板或培养皿

交联剂(包括在bioink采购中)

细胞+细胞培养基

3毫升带luer锁连接的注射器

阴/阴路厄锁适配器*或细胞混合器*

*该产品可在www.gaiachina.com.cn购买

协议

本协议可在室温下使用打印头和打印机执行,室温在20-25°C之间。

步骤 标题 材料 说明
1 准备生物墨水 — CELLINK® LAMININK 如果不使用细胞打印,则直接转到第 3 步。

– 将 CELLINK® LAMININK 墨盒加热至室温。

2

CELLINK

®LAMINI

NK 与细胞混合

– 带鲁尔锁接头的 3 ml 注射器

– 预热的CELLINK® SKIN

– 母/母鲁尔锁接头 – 注射器中的细胞悬浮液

此时,将十份 bioink 与一份细胞悬浮液混合,注意不要将气泡引入混合物中。有关详细说明,请参阅Mixing Cells Protocol CELLINK 系列。

– 使用母/母鲁尔锁接头将细胞悬液转移到 1 ml 细胞注射器(第 1 部分)。

– 使用母/母鲁尔锁适配器将 bioink 转移到 12 毫升注射器(第 2 部分)。

– 将两个注射器夹在分配装置上(第 3 部分)。

– 将两个注射器连接到混合装置(第 4 部分),然后将空墨盒(第 5 部分)连接到混合装置的另一侧。

– 轻轻按压分配装置,将两个注射器的内容物混合到空墨盒中。

注意:为避免在混合 bioink 和细胞悬液时出现气隙,请在将注射器与细胞悬液连接之前小心地用CELLINK® LAMININK 预填充 Luer Lock 适配器。如果准备的 CELLINK® LAMININK 数量小于 2 毫升,建议连接两个 3 毫升鲁尔锁注射器并在注射器之间来回混合直至均匀。

3 冷却并装入墨盒 – 透明墨盒,装有 CELLINK® LAMININK(和

电池)的 3cc

– 无菌锥形生物打印喷嘴。

– 将经过室温处理的 CELLINK® LAMININK 放入带有所选打印喷嘴的打印头和盖子中。 推荐的喷嘴尺寸为 22G。 降低喷嘴直径以实现更小的灯丝直径,但这也会增加 bioink 堵塞的风险。
4 打印 – 生物打印机

(推荐 BIO X

 

– 生物打印结构的参数根据表 1 或应用说明中的打印参数。 如果打印性不符合要求,将压力向上

/向下调整 1 kPa 以挤出更多/更少的材料。

注意:如果在两次挤压之间等待时间过长,生物墨水可能会在喷嘴中变干,从而导致喷嘴堵塞。 如果发生这种情况,请更换新的喷嘴。

INKREDIBLE

系列)

– 孔板或培养

表1.建议的最小挤压压力*(±2 kPa)用于在21-25°C下打印连续长丝,有单元/无单元。同样,“有细胞”假设一份细胞悬浮液和十份生物墨水的混合物。有关灯丝直径的信息,请参见应用笔记中的打印参数。对于高度浓缩的细胞悬浮液,压力需要增加到用于未稀释生物墨水的压力。

 

 

 

*注意,这只是推荐的起始压力参考。 所需的实际压力将根据制备程序(生物墨水的量和生物墨水的实际温度)以及活塞在墨盒中的安装和打印表面的平整度而有所不同。 该表是在打印头温度为 22°C 时“无细胞”和 27°C“有细胞”以及使用低浓度细胞的bioink 稀释生成的。

步骤 标题 材料 说明
5 交联 交联液

细胞培养基

 

CELLINK® LAMININK 可以使用 CaCl2 交联溶液与离子交联。

– 根据构建体的大小,将载有细胞的构建体浸入
交联溶液中 30 秒至 5 分钟。 去除交联溶液并
用基础培养基冲洗一次构建体。
6 孵化 -细胞培养基 交联和洗涤后,将所需培养基添加到构建体

中并放入孵化器。

在标准培养条件(37°C、5% CO2 和 95% 相对湿度)或根据您的应用在细胞培养基中孵育构建体。

上一篇:
下一篇:

返回页表