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新闻  丨 2021.09.17

OZ Biosciences翻译定制MRNA

OZ Biosciences 提供模拟完全加工成熟mRNA定制。

凭借超过 15 年的核酸递送专业知识,OZ Biosciences 有信心为您提供一流的服务来生产高质量的 mRNA。我们能够合成微克到数克规模的定制 mRNA,从几百个到几千个碱基,进行各种修饰,包括带帽的 5′ 末端修饰、内部修饰,例如 5-甲氧基尿苷(其他修饰的核苷酸也可用) ) 和 3′ 修饰,例如 poly-A 尾。可以使用 Cy5、Cy3 或其他选项进行荧光标记。我们还提供未修饰的 mRNA。

我们的服务包括:

– 基因合成、克隆和 DNA 模板生产

-体外转录合成mRNA

– 纯化和质量控制

3种mRNA:

– Reporter gene mRNAs: 研究转染效率的理想对照

– Genome editing mRNA: 用于 CRISPR 基因组编辑的 Cas9 mRNA

– Vaccine mRNAs: 作为免疫或疫苗研究的理想对照

mRNA 转染具有以下几个优点:

* 不需要核摄取 – 蛋白质直接在细胞质中表达

* 比DNA 转染更快的蛋白质表达

* 无基因组整合

* 蛋白质表达与mRNA数量直接相关

* 非常适合转染慢细胞或非分裂细胞

* 以完全不依赖启动子的方式表达蛋白质

* 瞬时转染:基于 mRNA 的蛋白质表达持续有限的时间

Reporter gene mRNAs(5moU): 研究转染效率的理想对照

报告基因常用于细胞生物学研究。 OZ Biosciences 提供的报告基因 mRNA 可用作对照,以使用各种检测方法研究哺乳动物细胞中的转染和表达。 它们模拟完全加工的成熟 mRNA。

这些 mRNA 是通过体外转录产生的,并通过修饰的核苷酸加帽 (Cap1) 在 5′ 端稳定。它们在 3′ 末端包含一个 poly(A) 尾,并且还经过优化以提高稳定性和性能。它们用 5-甲氧基尿苷(5moU 取代 U)修饰以减少先天免疫反应。

技术要点:

*GFP mRNA 旨在产生高表达水平的绿色荧光蛋白。 它是哺乳动物细胞培养中常用的直接检测报告基因,可产生亮绿色荧光,发射峰位于 509 nm。

*F-Luc mRNA旨在产生高表达水平的 FireFly 荧光素酶。它通常用于哺乳动物细胞培养以测量基因表达和细胞活力。它在底物荧光素存在下发出生物发光。

*Tomato mRNA旨在产生高表达水平的橙色荧光蛋白。检测可以通过荧光或共聚焦显微镜来完成。生产的番茄的最大激发波长为 551-557 nm,最大发射波长为 579-583 nm。番茄表达水平也可以通过荧光激活细胞分选仪分析 (FACS) 进行监测。

*mCherry mRNA 编码荧光蛋白 mCherry,该蛋白源自 DsRed,一种在Discosoma sp 中发现的蛋白质 。mCherry 是一种单体荧光团,在 587 nm 处具有峰值吸收,在 610 nm 处发射。它具有光稳定性和耐光漂白性。

*β-半乳糖苷酶 ( β-gal) mRNA,编码细菌 LacZ基因的蛋白质产物。 β-gal催化β-半乳糖苷转化为单糖。它是用于评估转染效率的常用标记基因。

常用型号有:mRNA10-20、mRNA10-100、mRNA10-1000、mRNA11-20、mRNA11-100等,储存:-80°C

应用:使用多种检测方法在哺乳动物细胞中表达,包括荧光显微镜、定量荧光测定法和生物发光成像,以及荧光激活细胞分选 (FACS)。

推荐用于:转染效率的阳性对照

Genome editing mRNA: 用于 CRISPR 基因组编辑的 Cas9 mRNA

质粒和病毒载体传统上用于 CRISPR 基因组编辑以表达所需的蛋白质。然而,使用 DNA 代替 mRNA 存在风险:双链 DNA 断裂催化 DNA 在切割位点插入。在一些相当大的频率下,蛋白质表达载体可以整合,这可以导致核酸酶或先前沉默的序列的连续表达。

现在 mRNA 正在成为基因组编辑的强大工具。由于没有插入突变的风险,mRNA 用于瞬时表达所需的蛋白质。野生型 Cas9 mRNA 是一种稳定的非免疫原性信使 RNA (mRNA),旨在产生高表达水平的野生型 Cas9 蛋白。它在由 RNA 指导序列描绘的目标位点处产生双链断裂。

该 mRNA 是通过体外转录产生的,通过修饰的核苷酸加帽在 5′ 端稳定,并在 3′ 端包含聚 (A) 尾。mRNACas9 经过优化,可提高稳定性和性能,并降低细胞先天免疫反应。

常用型号有:mRNA31-20、mRNA31-100、mRNA32-20、mRNA32-100、mRNA32-1000、mRNA33-20、mRNA33-100、mRNA30-1000、mRNA 31-1000等,储存:-80°C

应用:对于 Cas9 mRNA:用于诱导 DNA 中的定点双链断裂。这些断裂可分别通过非同源末端连接和同源重组导致基因失活或引入异源基因,为基因组编辑提供有效工具。

CRE mRNA类似于完全成熟的 mRNA,具有 5’cap1 结构和 3’polyA 尾,因此可以被核糖体翻译。mRNA32 编码 CRE 重组酶,该酶催化 loxP 位点之间的 DNA 重组。重组产物取决于 loxP 位点的位置和相对方向:

Vaccine mRNAs: 作为免疫或疫苗研究的理想对照

与传统的 DNA 和基于病毒的方法相比,mRNA 疫苗具有多种优势:

表达所需抗原并作为佐剂。

防止基因组整合的风险,不需要灭活病毒或病原体。

不需要核摄取 – 蛋白质直接在细胞质中表达

非常适合转染慢细胞或非分裂细胞,如抗原呈递细胞 (DC)

比 DNA 转染更快的蛋白质表达

以完全不依赖启动子的方式表达蛋白质

瞬时转染:基于 mRNA 的蛋白质表达持续有限的时间

常用型号有:mRNA41-20、mRNA41-100、mRNA41-1000、mRNA42-20、mRNA42-100、mRNA42-1000等,储存:-80°C

应用:

OVA mRNA 编码 OVA 蛋白,OVA 蛋白是免疫和生化研究常用的抗原,也是已建立的气道高反应性模型过敏原。

我们提供修饰的 OVA mRNA (5moU)和未修饰的 OVA mRNA ,它们通过体外转录产生,并通过修饰的核苷酸加帽 (Cap1) 在 5′ 端稳定。它们在 3′ 末端包含一个 poly(A) 尾。

– 外源未修饰的 mRNA激活先天免疫系统和细胞因子的产生,以影响诱导的免疫反应。

– 修饰的 mRNA (5moU-ref# mRNA41) 用 5-甲氧基尿苷修饰。这种核苷修饰增强了 mRNA 的稳定性和翻译能力,同时降低了其体内免疫原性。

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